然而，CAR-T治療引起的細胞因子風暴仍然沒有有效改善；近日發(fā)現(xiàn)人體預先存在對Cas9蛋白的自適應免疫，給Cas9基因治療的前景蒙上陰影；被認為是最安全最有前景的基因治療載體的腺相關病毒（AAV）也被發(fā)現(xiàn)并不是那么安全，高劑量注射AAV存在嚴重毒性。

1月29日，Human Gene Therapy雜志發(fā)表了美國賓夕法尼亞大學佩雷爾曼醫(yī)學院James.M.Wilson教授作為通訊作者的題為：Severe toxicity in nonhuman primates and piglets following high‐dose intravenous administration of an AAV vector expressing human SMN的研究文章（圖1）。研究認為靜脈高劑量注射AAV病毒用于基因治療會有嚴重毒性。

注：James.M.Wilson教授是全球著名的基因治療專家，曾任美國基因與細胞治療協(xié)會主席；已在Nature、Nat Biotech、Nat Genet、Nat Med、PNAS、Immunity等國際權威學術期刊發(fā)表研究論文近500篇。

圖1

AAV9已經被證實在高劑量靜脈內給藥時可以轉導脊髓α運動神經元。這一結果導致最近成功地應用靜脈內AAV9遞送來治療脊髓性肌萎縮癥（SMA）。為了評估使用AAV9變體(AAVhu68)轉導運動神經元的效率，對3只恒河猴(14個月)和3只仔豬(7 - 30天)靜脈注射攜帶人源SMN基因的AAVhu68載體，其劑量與SMA臨床試驗中使用的相同。

2×10E14基因組拷貝/kg動物體重注射量的AAV在這兩種動物的脊椎運動神經元中轉染效率很好（圖2、3）。 

圖2--AAV載體在恒河猴各組織中的基因拷貝數(shù)

圖3--AAV載體在仔豬各組織中的基因拷貝數(shù)

然而，高劑量AAV注射后，在恒河猴和仔豬中都引起了嚴重的毒性。所有的三只恒河猴都出現(xiàn)明顯的轉氨酶升高。 有兩個轉氨酶升高后消退，沒有臨床后遺癥，而有一個發(fā)生急性肝衰竭和休克，并且在注射AAV載體后4天被安樂死（圖4）。

圖4--注射AAV后，三只非人靈長類動物轉氨酶變化趨勢圖

此外，還觀察到背根神經節(jié)(DRG)感覺神經元的退化，但未表現(xiàn)出臨床上明顯的缺陷。在恒河猴中，臨床表現(xiàn)與T細胞對AAV載體衣殼或轉基因產物的反應沒有相關性。

仔豬沒有表現(xiàn)出肝毒性，但在AAV載體注射后的14天內，所有三只仔豬表現(xiàn)出感受缺陷和共濟失調，嚴重損害其行動能力，不得不對其進行了安樂死。在引起感覺神經元缺陷上，豬比恒河猴更加嚴重。

肝和感覺神經元的毒性似乎是AAV轉染的直接結果，獨立于AAV病毒衣殼或轉基因產物的免疫反應。

目前的實驗結果和利用不同的AAV9變體和轉基因的另一個最近的研究的結果表明，系統(tǒng)性和感覺神經元毒性可能是高劑量靜脈內遞送AAV載體的普遍性質，與衣殼血清型或轉入基因無關。

該研究未使用小鼠實驗，換算一下，一只30g體重的成年小鼠，注射AAV病毒量高于6×10E12GC，可能就會產生嚴重毒性作用。實際實驗中，也很少有人會注射這么高的劑量，主要原因是這么大量的使用AAV確實太貴了。

但是，涉及高劑量的AAV載體的臨床前和臨床研究的，還是要仔細監(jiān)測類似的毒性作用。

原文鏈接：

http://online.liebertpub.com/doi/pdf/10.1089/hum.2018.015

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